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无菌室管理知多少?

作者:西安长研检测技术有限公司 来源:洁净室综合性能检测 日期:2018/5/28 19:11:50 人气:385
无菌室的要求:
1、需要建立无菌室管理制度。
2、保持良好的卫生:相对湿度40%---60%,温度20—22℃,最好安装空调。
3、无菌室不得进行其他工作,非操作所使用的物件一律不得放入,检后的余样不得存放。
4、紫外灯的使用期限一般为300小时,要记录使用时间,到期更换。
无菌操作及要求
以菌落总数、大肠菌群为例演示无菌实验流程
 1、实验前准备工作:
对实验台、手、检验用具进行消毒(保证无菌环境和无菌实验用品),微生物的理想环境是无菌,但是更应该做好防护,保护自己。防护衣服,口罩手套必须佩带。
对实验的台面进行擦拭消毒,一般用75%乙醇或新洁尔灭溶液。
为保持无菌的进行,对手心手腕这些容易残留细菌的部位进行消毒处理。
实验台上面的药品、盛装样品的盒子等实验用工具要进行消毒处理。
实验前对培养基的检查、无菌条件下称样
1)实验前检查大肠菌群培养基的量、导气管内是否有气泡。
2)开启超净台风机、在无菌、空气缓慢流动状态下工作。
3)进行无菌称样,这一步其实最好是要佩带手套的。
进行无菌接菌实例
1)已干热灭菌的吸管使用前过火焰灭菌。
2)无菌吸样
3)无菌接种
无菌倾倒菌落总数培养基
 大肠菌群复发酵接菌(接菌环使用)
1)接种针灭菌
2)接菌试管口灭菌
3)取菌
在接种或向培养皿内倒培养基时,试管口或瓶壁外面不要接触皿底,试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。
总结
微生物实验室工作人员,必须有严格的无菌观念,许多实验要求在无菌的条件下进行,主要原因:
一是防止试验操作中人为污染样品,二是保证工作人员安全,防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。
要求如下:
无菌室使用与管理要求
1.工作室应矮小、平整,面积小,高2.2―2.3米,内部装修应平整、光滑,无凹凸不平或棱角等,四壁及屋顶应用不透水之材质,便于擦洗及杀菌。
2.室内采光面积大,从室外应能看到室内情况。
3.为保证无菌室的洁净,无菌室周围需设缓冲走廊,走廊旁再设缓冲间,其面积可小于无菌室。
4.无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯,杀菌紫外灯离工作台以1米为宜,其电源开关均应设在室外。
5.无菌室与缓冲间进出口应设拉门,门与窗平齐,门缝要封紧,两门应错开,以免空气对流造成污染。
6.无菌室的使用与管理
(1)无菌室应保持清洁整齐,室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环等。不要放与检测无关的物品
(2)室内检验用具及凳桌等保持固定位置,不随便移动。
(3)每2―3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面,然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气,最后紫外灯杀菌半小时。
(4)定期检查室内空气无菌状况,细菌数应控制在10个以下,发现不符合要求时,应立即彻底消毒灭菌。无菌室无菌程度的测定方法:取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个(平板直径均9厘米),置无菌室各工作位置上,开盖曝露半小时,然后倒置进行培养,测细菌总数应置37℃温箱培养48小时;测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌、霉菌总数均不得超过10个为合格。
(5)无菌室杀菌前,应将所有物品置于操作之部位(待检物例外),然后打开紫外灯杀菌30分钟,时间一到,关闭紫外灯待用。
(6)进入无菌室前,必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。
(7)操作应严格按照无菌操作规定进行,操作中少说话,不喧哗,以保持环境的无菌状态。
 器材及场所的灭菌消毒
微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理,不同的对象采用不同的处理方法。
1.高压蒸汽灭菌:工作服、口罩、稀释液等,置高压杀菌锅内,一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理。
2.火焰灭菌:接种针、接种环等可直接火焰灭菌。
3.高温干燥灭菌:各种玻璃器皿、注射器、吸管等,置于燥箱中160℃灭菌2小时。
4.一般消毒:无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌,必须用其他方法进行消毒处理,采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒,工作人员的手也用此法进行消毒。
5.空气的消毒:开启紫外灯照射30―60分钟即可。
准备工作
1.先进行无菌室空间的消毒,开启紫外灯30―60分钟。
2.检验用的有关器材,搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒。
3.操作人员必须将手清洗消毒,穿戴好无菌工作衣、帽和鞋,才能进入无菌室。
4.进入无菌室后再一次消毒手部,然后才进行检验操作。
 操作过程注意事项
1.动作要轻,不能太快,以免搅动空气增加污染;玻璃器皿也应轻取轻放,以免破损污染环境。
2.操作应在近火焰区进行。
3.接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧,灼烧时先通过内焰,使残物烘干后再灼烧灭菌。
4.使用吸管时,切勿用嘴直接吸、吹吸管,而必须用洗耳球操作。
5.观察平板时不好开盖,如欲沾取菌落检查时,必需靠近火焰区操作,平皿盖也不能大开,而是上下盖适当开缝。
6.进行可疑致病菌涂片染色时,应使用夹子夹持玻片,切勿用手直接拿玻片,以免造成污染,用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒,然后再洗涤。

7.工作结束,收拾好工作台上的样品及器材,最后用消毒液擦拭工作台。

关键词:洁净室综合性能检测

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